%A 张楠，熊文雯，邢媛，张炜 %T
大鼠海马神经元及星形胶质细胞的体外培养%0 Journal Article %D 2017 %J 神经药理学报 %R 10.3969/j.issn.2095-1396.2017.01.003 %P 24-28 %V 7 %N 1 %U {http://actanp.hebeinu.edu.cn/CN/abstract/article_348.shtml} %8 2017-02-26 %X
目的：改进大鼠海马神经元、星形胶质细胞及两者混合状态的体外培养方法，获得高纯度的海马神经细胞。
方法：选取孕期18~20 d 的SD 大鼠胎鼠作为原代海马细胞培养的材料来源。断头后于冰板上剥离双侧海马，去除表面血管及薄膜，利用眼科剪分离为小块。随后使用冷平衡盐溶液洗涤3 次，将海马组织碎块移入酶消化液中。本方法选择Accutase 和0.1% DNase 作为酶消化液，37 ℃消化 15 min，期间轻柔振动。使用冷平衡盐溶液洗涤3 次，终止消化。0.1% DNase 加入Neurobasal 和B-27 的混合液对消化后的海马组织碎块进行轻柔吹打，获得单细胞悬液。将悬液过200 目筛，进行细胞计数。将过筛的单细胞悬液移入DMEM 培养基（DMEM+10%胎牛血清）中，按照每平方厘米2.5×104 的细胞密度进行接种。经PDL 孵育的塑料片置于培养基底部。细胞于37 ℃、5% CO2 培养箱内培养。4 h 后，依据所需细胞种类的不同，更换相应培养基。海马神经细胞于培养后7~10 d 可用于实验。
结果：通过本方法可得到高纯度的大鼠海马神经细胞，且根据实验需求，通过更换培养基，可得到纯神经元、纯胶质细胞及两者混合的三种培养状态。培养的神经元及星形胶质细胞纯度均>98%。
结论：该文在传统海马神经细胞体外培养方法基础上，进一步降低了实验操作难度，方法稳定有效。