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神经营养素4前导序列介导Exendin-4表达质粒的构建及鉴定
王俊红, 郭永红, 焦杨, 张静, 徐静, 谢璇, 杨广笑, 王全颖, 王枫
2012, 2 (3): 22-28.
摘要(
2071)
PDF(3395KB) (
1817)
目的:构建神经营养素4前导序列介导的可分泌表达Exendin-4的重组腺伴病毒载体,为探究Exendin-4用于2型糖尿病临床治疗提供实验基础。
方法:使用互补引物/模板法及T载体克隆法扩增Exendin-4的cDNA克隆,连接于NT4前导肽序列的3′端,融合基因NT4- Exendin-4亚克隆于穿梭质粒pSSHG,转染HEK-293细胞,包装病毒,斑点杂交方法测定重组病毒滴度。
结果:经酶切、测序证实克隆出Exendin-4 cDNA,成功构建同一开放读码框ORF的NT4前导肽-Exendin-4cDNA克隆,得到高滴度(2.5×10
9pfu·L
-1) 的重组腺相关病毒。
结论:通过分子克隆技术成功制备了Exendin-4的重组腺伴病毒载体pSSHG /NT4- Exendin-4并成功包装了较高浓度的重组病毒,为进一步研究Exendin-4功能及应用于临床打下基础。
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